細(xì)胞系與細(xì)胞株的概念

一、細(xì)胞系（CellLine）原代培養(yǎng)舞經(jīng)傳代成功即成細(xì)胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系（LineageofCells）所組成。二、細(xì)胞株（CellStrain）通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱為細(xì)胞株。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限,稱為有限細(xì)胞株（finitecellstrain）;如果可以連續(xù)傳代,稱為連續(xù)細(xì)胞株（continuouscellstrain）。對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞,在...

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干細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1、擴(kuò)增：不同的干細(xì)胞，其擴(kuò)增方法不同。如造血干細(xì)胞為懸浮培養(yǎng)，而腫瘤干細(xì)胞則為貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞。2、消化：根據(jù)細(xì)胞耐受性的不同，有多種方法，如機(jī)械法，化學(xué)法，以及膠原酶、胰酶消化等不同方法。3、凍存：取處于對(duì)數(shù)期的干細(xì)胞,消化,并吹打?yàn)閱渭?xì)胞懸液,用2X培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，將等體積DMSO逐滴加入細(xì)胞懸液中，輕輕吹打混勻，重懸細(xì)胞于凍存管中，并置于凍存盒中，凍存盒放入-80℃冰箱。4、分化：鑒定干細(xì)胞的一項(xiàng)重要指標(biāo)就是它的分化能力。一般分化采取加入細(xì)胞因子誘導(dǎo)、共培養(yǎng)、小分子刺...

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細(xì)胞培養(yǎng)用耗材污染與防治

一、培養(yǎng)用液1、未滅菌的試劑：高壓或過(guò)濾除菌。2、物品儲(chǔ)放區(qū)不潔：經(jīng)常清潔并作滅菌處理。3、消毒過(guò)程不標(biāo)準(zhǔn)：檢查高壓滅菌器是否工作正常；過(guò)濾后檢查濾膜是否破裂；滅菌后的液體仍需做無(wú)菌試驗(yàn)。4、一次性無(wú)菌用品不合格：進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)或更換供應(yīng)商。二、取材1、原代組織來(lái)源有污染，不要把動(dòng)物帶入培養(yǎng)室處理；2、可能有污染的組織應(yīng)在酒精中浸泡30s－1min，在清洗用的PBS中加入抗生素。三、玻璃器皿1、儲(chǔ)存時(shí)灰塵或細(xì)菌孢子進(jìn)入－一消毒后的器皿應(yīng)嚴(yán)密包裹，置于無(wú)菌物品放置區(qū)；未包裹物品放...

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細(xì)胞的兩種運(yùn)輸方法

一、凍存運(yùn)輸使用干冰置于塑料泡沫盒中，處理得當(dāng)，可以保存3天。一旦出現(xiàn)融解，細(xì)胞活力將急劇下降。將細(xì)胞凍存管?chē)?yán)密包裹，所用塑料泡沫盒應(yīng)該不小于300×300×300mm，壁的厚度約為50mm，內(nèi)部空間為200×200×200mm，這樣大的空間需放入5kg干冰。以zui快的速度將細(xì)胞從液氮轉(zhuǎn)入干冰中，否則細(xì)胞將以10～20℃／min的速度升溫。不能讓溫度高于－50℃。到達(dá)目的地后，即可按常規(guī)復(fù)蘇處理。二、活細(xì)胞運(yùn)輸細(xì)胞應(yīng)該處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期早期或中期，狀態(tài)良好。如果細(xì)胞密度過(guò)大，培...

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生化試劑的類型概述

一、按劑型分類1、液體試劑①R1和R2分開(kāi)保存,延長(zhǎng)穩(wěn)定性；瓶間差小，沒(méi)有復(fù)溶時(shí)水質(zhì)引起的差異，使用方便；②可較*排除樣品空白和內(nèi)外源干擾物。2、干粉試劑將各組份溶于液體中分裝再凍干，或用球磨粉碎、或混合后打成片劑，用前再加入量的緩沖液使其溶解（稱復(fù)溶）。二、按試劑組成分類1、單試劑①優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便適用于各類生化分析，節(jié)約試劑位。②缺點(diǎn)：配方復(fù)雜（穩(wěn)定劑），穩(wěn)定性，不能*避免內(nèi)外源物質(zhì)干擾。2、雙試劑①優(yōu)點(diǎn)：可較*排除樣品空白和內(nèi)外源干擾物，試劑穩(wěn)定，便于儲(chǔ)存，運(yùn)輸和使用，可...

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細(xì)胞復(fù)蘇的方法改進(jìn)

一、背景細(xì)胞存儲(chǔ)于-170°以下的液氮罐中，在細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)需要快速地將細(xì)胞凍存管放入37°水浴鍋中快速升溫至37°避免對(duì)細(xì)胞造成損傷。在復(fù)蘇過(guò)程中凍存管需要用手拿著在搖晃，一個(gè)人同時(shí)只能拿2-4管，當(dāng)復(fù)蘇較多的細(xì)胞時(shí)一個(gè)人就無(wú)法操作，這給復(fù)蘇細(xì)胞帶來(lái)了極大的不便。二、方法改進(jìn)采用一個(gè)裝15ml離心管的泡沫板制作一個(gè)凍存管托盤(pán)，其托盤(pán)為：將其底部穿通，孔夠凍存管的大小相當(dāng)，使凍存管放入恰好卡住；在托盤(pán)中間插一個(gè)桿作為手柄。在復(fù)蘇時(shí)將凍存管放在泡沫板托盤(pán)上，手拿著托盤(pán)手柄，將載有凍...

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凍存細(xì)胞解凍步驟及注意事項(xiàng)

一、凍存細(xì)胞解凍步驟1、將細(xì)胞凍存管從加有液氮的保溫桶中用鑷子夾牢，快速在37度水浴鍋中擺動(dòng)，使凍存液迅速解凍融化。注意在這過(guò)程中盡量使凍存管蓋位于水面上。2、待凍存管中大部分內(nèi)容物已呈液態(tài)時(shí)，將凍存管表面消毒后移入生物安全柜。二、注意事項(xiàng)1、在細(xì)胞復(fù)蘇操作時(shí)，應(yīng)注意融化凍存細(xì)胞速度要快，可不時(shí)搖動(dòng)凍存管，使之盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5～0℃）。這樣復(fù)蘇的凍存細(xì)胞存活率高，生長(zhǎng)及形態(tài)良好。2、從液氮罐中取出凍存管，有時(shí)因凍存管未封嚴(yán)，浸入了液氮，取出后因凍存管內(nèi)液氮迅...

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生化試劑的校準(zhǔn)與結(jié)果溯源性

酶的校正要滿足在同一方法學(xué)、同一測(cè)定條件、與理論計(jì)算的FACTOR值差異不大，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素，方可進(jìn)行校正。檢驗(yàn)結(jié)果溯源性，得建立一個(gè)可靠的參考系統(tǒng)作為準(zhǔn)確性基礎(chǔ)，然后將準(zhǔn)確性轉(zhuǎn)移到常規(guī)方法測(cè)定中去，使常規(guī)方法測(cè)定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準(zhǔn)確性基礎(chǔ)上來(lái)。在實(shí)現(xiàn)溯源性目標(biāo)過(guò)程中，永遠(yuǎn)以患者新鮮標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以方法學(xué)對(duì)比試驗(yàn)方法為驗(yàn)證手段。方法學(xué)對(duì)比試驗(yàn)常采用回歸方程進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，假如斜率接近1，截距較小，這意味著實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法對(duì)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果和溯源目標(biāo)參考系統(tǒng)對(duì)標(biāo)本...

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