飼養層細胞的培養

一、主要實驗材料1、培養液為F-DMEM。2、小鼠周齡為7～8w的性成熟母小鼠和周齡為8w的種公鼠。二、小鼠胚胎成纖維細胞（MEF）的培養1、小鼠胚胎的準備①性成熟母小鼠與種公鼠按1公（♂）:2母（♀）比例合籠。②每天早上觀察母小鼠陰道口。有乳白色或蛋黃色凍膠狀物（陰道栓）即確定為懷孕。④見栓當天上午定為懷孕的0.5d。③取懷孕12.5～14.5d母鼠,斷頸處死，無菌條件下暴露子宮。餿用鑷子提起近子宮頸端,分離子宮系膜,剪斷子宮角。⑤取出整個子宮,在無菌濾紙上吸干血跡,置于有...

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多克隆抗體的制備過程

1、免疫脾細胞的制備制備單克隆抗體的動物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2、骨髓瘤細胞的培養與篩選在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養基中存活）。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養液在細胞培養瓶中培養，融合前24h換液一次，使骨髓瘤細胞處于對數生長期。3、細胞融合的關鍵:①技術上的誤差常常導致融合的失敗。②融合試...

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抗體的四種定義

抗體monoclonalantibody；McAb1、定義1：能與相應抗原（表位）特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。所屬學科：免疫學（一級學科）；免疫系統（二級學科）；免疫分子（三級學科）2、定義2：在人和動物體內，由于抗原或半抗原入侵刺激機體而在細胞中產生的免疫球蛋白。能可逆、非共價、特異地與相應抗原結合，形成抗原-抗體復合體。所屬學科：生物化學與分子生物學（一級學科）；總論（二級學科）3、定義3：機體內B細胞在抗原刺激下產生的具有特異性功能的球蛋白。所屬學科：水產學（一級...

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細胞培養技術在生物醫學研究中的優缺點

一、優點1、直接觀察活細胞的形態結構和生命活動。用于細胞學、遺傳學、免疫學、實驗醫學和腫瘤學等多種學科研究。2、直接觀察細胞的變化可便于攝影。3、研究細胞種類如低等到高等到人類、胚胎到成體、正常組織到腫瘤。4、便于使用各種技術：相差、熒光、電鏡、組化、同位素標記等方法觀察和研究細胞狀況。5、是分子生物學和基因工程學的研究對象，也是其主要的組成部分。6、易于施用物理、化學生物的實驗研究。7、易于提供大量生物性狀相似的實驗對象,耗資少比較經濟。8、成為生物制品單克隆抗體生產和基因...

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細胞傳代注意事項

1、紫外消毒過程中會產生臭氧分子，對人體有害。一般情況下，消毒后至少半小時后再進入。2、所有的實驗器材都要經過消毒處理；所有的細胞操作都在安全柜中進行，每一步都要注意不能用手碰到瓶口，培養液不能碰到瓶口，拿培養瓶時要使培養瓶的瓶口微微翹起。3、細胞消化時間不能太長，要讓細胞盡快脫離不舒服的環境；離心時離心機轉速不能太高，實驗前要設定好離心轉速和時間；重懸細胞時要保證細胞*混勻，在顯微鏡下觀察細胞是一個一個的。4、傳代培養時要注意無菌操作并防止細胞之間的交叉污染。所有操作要盡量...

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血清的化凍、滅活與分裝

1、化凍將血清（FetalBovineSerum，Hyclone）從－20℃冰箱取出，放于4℃冰箱化凍過夜；也可室溫（或浸于自來水中）化凍，化凍后若不馬上滅活，可以放入4℃冰箱暫時保存；2、滅活①放入室溫的水浴鍋內開始加熱（同時放入一個內裝200ml自來水的血清瓶，插入一根溫度計，溫度監控以此為準）；②當溫度計顯示56℃時，控制在此溫度30分鐘±3分鐘；若不小心使溫度上升超過56℃，則：若仍未超過60℃，且時間很短（比如：不超過5分鐘），則仍可使用；若超過60℃...

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細胞株凍存條件及方法

1、凍存條件：建議采用40-50%FBS+8%-10%DMSO+該細胞株無血清培養基2、凍存方法：①梯度凍存：4℃——1h；-20℃——30min；-80℃——過夜②使用凍存盒：直接放入-80℃冰箱中過夜（有些細胞不適應此種方法）3、復蘇方法：①打開水浴，將培養基放入水浴中，待其穩定至37℃；②細胞從液氮內取出后，應快速將細胞放于37℃水浴中，輕輕振搖，使其溶化，（盡量避免溶化前凍存管脫離水?。?；③將溶化后將細胞凍存懸液離心，轉速1000rpm，3min,后棄去上清，使細胞重...

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細胞培養室的環境要求

細胞生長要求嚴格的無毒無污染環境，因此必須注意培養室的清潔衛生，保持操作空間的無菌條件。1、培養室應為獨立、封閉的空間。培養室及緩沖間都應保持整潔，不要隨意出入；2、保持超凈工作臺的無菌環境，每次使用前打開紫外燈照射消毒15—30分鐘；每次使用后將廢棄物清理干凈，各用具規放整齊，用70%酒精擦凈臺面，再打開紫外燈照射30分鐘以上；3、定期擦洗桌面、地板、清潔培養室，并用0.1%的新潔爾滅溶液消毒；定期打開培養室的大紫外燈，將整個房間進行照射消毒；4、每次打開培養箱前，或手伸入...

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