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    ELISA試劑盒操作過程中可能出現(xiàn)的問題和解決方法

    更新時間:2013-10-31點擊次數(shù):317
     操作過程中可能出現(xiàn)的問題和解決方法
    問題 可能原因 解決方法
    顯色淡,靈敏度偏低 1、試劑盒在運輸途中時間太長,溫度太高 盡量縮短運輸時間,夏季應(yīng)放冰塊降溫
    2、試劑盒未充分平衡 試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋,于室溫平衡至少20分鐘,確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)。
    3、培養(yǎng)箱溫度不足37℃ 注意培養(yǎng)箱溫度,放入反應(yīng)板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定,非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意
    4、保溫時間不足 校正定時鐘準(zhǔn)確定時
    5、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加 按說明書要求保留洗滌時間,準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)
    6、移液器吸液量不足,吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔 校正移液器,吸嘴要配套,裝吸嘴時要緊密,吸嘴內(nèi)壁要清潔,一次性使用
    7、蒸餾水水質(zhì)有問題 使用新鮮合格的蒸餾水
    8、底物作用時間不足 準(zhǔn)確定時
    背景深,全部呈有色, 1、洗滌不充分,洗后未拍干,樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留 濃縮洗液準(zhǔn)確配制;10倍濃縮洗滌液如有結(jié)晶則應(yīng)讓結(jié)晶于室溫全部溶解后再量取稀釋;充分洗滌,*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用,不要反復(fù)使用,否則易造成污染
    2、樣品污染 樣品應(yīng)新鮮采集,或低溫保存,防止污染
    3、培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時間過長 調(diào)整培養(yǎng)箱溫度,準(zhǔn)確定時
    4、吸嘴重復(fù)使用,未洗凈或消毒不* 吸嘴盡可能一次性使用
    5、蒸餾水被污染 使用新鮮蒸餾水
    6、酶等試劑混用 不同批號試劑勿混用
    7、一次實驗的標(biāo)本量過多,加樣時間太長,導(dǎo)致實際反應(yīng)時間延長 合理安排實驗,避免幾塊酶標(biāo)板同時加樣
    重復(fù)性不佳 1、樣品數(shù)量多少不一,加樣時間有長有短 重復(fù)某一樣品時,加樣時間盡可能與*次接近
    2、保溫時間不一致,洗滌條件不一致,操作人員不一致 重復(fù)測定標(biāo)本,操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致,以排除這些因素造成的不一致的可能性
    3、加樣量不一致 樣品稀釋前應(yīng)充分混勻,盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴
    出現(xiàn)白板,陽性對照不顯色 顯色液變質(zhì) 更換新的顯色液
    洗滌液配制有誤 請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制
    未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入 注意不要漏加
    終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂?/td> 每次加液前均應(yīng)看清標(biāo)簽
     
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